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氨基酸水解与分析的综合指南

介绍

在食品、饲料和生物治疗产品的研究、开发和商业化过程中，准确分离、识别和定量氨基酸是一项挑战。常见的应用需要充分的样品水解，这是分析结合氨基酸（如肽和蛋白质）的工作流程中的重要第一步。水解允许分析释放出的氨基酸，这些氨基酸可以通过离子交换或反相色谱法进行分离。鉴于样品准备流程中的挑战，本文件编制了用于样品水解的实用指南。本文档中包含的材料仅作为此过程的起点。根据样品类型及其复杂性，可能需要对所述水解方法进行修改。有关水解或特定程序的额外信息或故障排除建议，您应联系水解仪器的制造商或相关机构——官方分析化学家协会（AOAC）。Waters 无法提供特定样品类型的指导。为了通过 HPLC 或 UPLC 分析水解样品（释放的氨基酸），Waters 提供了多种解决方案，使用前柱衍生化技术，以便通过光学检测分析氨基酸。由于这是工作流程的一个关键部分，我们简要介绍了 Waters HPLC（AccQ•Tag）方法和 UPLC 氨基酸分析（AccQ•Tag Ultra）解决方案。本文档不包含与 Waters Pico-Tag（苯基异硫氰酸盐前柱衍生化试剂）氨基酸分析方法相关的信息。虽然 Pico-Tag 方法仍然可用，但基于 AccQ•Tag 的方法提供了显著的性能优势，并且推荐用于新的应用。注意：本文件专注于纯化蛋白质/肽、食品和饲料的水解与氨基酸分析。不针对尿液、血浆、全肠外营养产品或细胞培养基中氨基酸的分析。有关这些应用的信息，请访问 www.waters.com/AAA 和 www.waters.com/Kairos。

一般分析指南和建议

由于氨基酸在环境中广泛存在，背景污染很容易导致一些氨基酸的目标样品分析中出现 20 pmol 或更多的污染，特别是丝氨酸（Ser）和甘氨酸（Gly）。可以通过采取特殊预防措施来减少这种量。或者，如果足够的样品被水解以提供每种氨基酸至少 200 pmol，背景污染的贡献可以限制在 10% 以下。无论如何，为了利用现代衍生化技术和色谱系统的灵敏度，这些系统的检测限可能为 1 pmol 或更低，保持洁净和良好的实验室技术至关重要。污染源无处不在；脏的玻璃器皿、实验动物、空气中的尘埃、指纹和滑石粉都是常见的污染源。虽然没有单一完美的系统来提高低水平氨基酸分析的整体质量，但以下考虑和实践有助于改善分析结果：

在 500 °C 下将所有 6 x 50 mm 水解管（零件号：WAT007571）进行过夜热解，以获得最洁净的玻璃器皿。取出管子后，用铝箔（用丙酮清洗过）包裹，并存放在封闭区域。
注意 pipets、一次性尖头、注射器和其他配件可能引入的污染。
在水解之前，使用清洁、无粉末的手套和清洁镊子进行所有操作。使用外科口罩可能是适当的。
始终使用新鲜试剂。每种试剂都可能成为污染源。最佳做法是将刚打开的瓶子分装到更小、更干净的容器中。
每周检查试剂质量，通过对照空白衍生化进行检查。
尽可能使用气相水解程序。不纯的 HCl 可能是水解结果不可靠的来源。我们发现最一致的结果来自常沸 HCl。高纯度的试剂级浓盐酸可能不如常沸等级纯净，并且氯含量显著较高。
测试水和缓冲液成分是否对背景污染有贡献，作为对照样品。例如，实验室用的双蒸水常常会带来不可接受的氨基酸水平。为了获得最佳水质，我们强烈推荐使用纯化系统（18.2mΩ-cm 水）。
水解的适当对照空白样品是经过与样品相同处理的样品管，包括水解步骤。

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