比利时 Consort EHS1000 系列 水平电泳 EHS1050/EHS1200/EHS11300

比利时 Consort EHS1000 系列 水平电泳 EHS1050/EHS1200/EHS11300

关于水平电泳
凝胶浓度要分离的片段大小范围将决定凝胶中琼脂糖浓度的选择。典型的琼脂糖浓度为0.5%至3.0%。对于大DNA片段,需要低浓度的凝胶,而对于小DNA片段,建议使用高浓度的凝胶。弱凝胶(0.5%琼脂糖)应在低温下进行电泳(例如-4°C)。对于常规电泳,建议使用0.75%至1.0%的琼脂糖凝胶进行广泛的分离(0.15至15kb)。PCR片段解析通常选择2…4%的琼脂糖凝胶。如果凝胶需要随后拍照,使用低浓度琼脂糖的薄凝胶(2到3毫米)比厚或高浓度的凝胶更好,后者会产生增加的浑浊和自发荧光

电泳缓冲液TAE缓冲液提供了对长度大于4kb的片段的最佳分辨率,而对于0.1到3 kb的片段,应选择TBE缓冲液。TBE的缓冲能力和导电性都比TAE高,因此应用于高压电泳。此外,TBE缓冲液在相同电压下产生的热量比TAE少,并且不会导致显著的pH漂移。注意:由于TAE的缓冲能力较低,因此在进行全长电泳时,尤其是在较高电压下,应定期循环或混合TAE。

温度影响高电压电泳会产生热量。此外,高导电性缓冲液(如TAE)产生的热量比低导电性缓冲液更多。在电压大于175 V的琼脂糖凝胶电泳中,应谨慎操作,因为热量积累可能导致凝胶伪影,如S形迁移前沿,在延长电泳运行中,甚至可能导致琼脂糖凝胶熔化在高电压电泳中,应避免使用低熔点琼脂糖凝胶。

RNA迁移率在电泳之前或电泳过程中,RNA应该变性。例如,用甲醛和二甲基亚砜变性的RNA片段可以在中性琼脂糖凝胶上分离,或者RNA可以在含有氢氧化汞或甲醛的琼脂糖凝胶上分馏。RNA样品通常需要较长的运行或容易耗尽的缓冲液,因此有必要循环缓冲液。通常不应在小型凝胶槽上进行北分析。

分离性能凝胶浓度、运行缓冲液、电压、温度、构象和溴化乙烯的存在都会影响分离结果。为了确定双链DNA的进展,常在运行缓冲液中加入0.5微克/毫升的溴化乙烯基。该染料的荧光特性使其在紫外灯下能够可视化。然而,溴化乙烯可能会使DNA迁移率减慢约15%。另一种选择是,在电泳后,凝胶可以在溴化乙锭(0.5ug/mlH20)中染色15至60分钟,然后在紫外透射灯上观察或拍照。

EHS1050迷你电泳


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